Assassin's Creed: Brotherhood, третья игра серии, в жанре приключений. Разработкой занималась компания Ubisoft, которая выпустила 19 ноября 2010 года версию для консолей Xbox 360 и PlayStation 3, а в марте 2011 года версию для ПК.
События игры происходят в Италии, в конце 15 века, продолжая историю предыдущей части. Только на этот раз главный герой, Эцио Аудиторе продолжает свою борьбу с тамплиерами в Риме. Город из-за не компетенции властей пришел в упадок. На улицах царит хаос и анархия, а уровень преступности очень высок. Именно в это время в городе появится Эцио, которому придется его возрождать и избавлять население от власти тамплиеров.
Эцио Аудиторе уже 40 лет, и он теперь занимает высокое положение в иерархии ордена ассасинов. Во второй части он отомстил за убийство отца и братьев, и сейчас живет на своей вилле возле Рима, наслаждаясь жизнью. Начало игры происходит с 1499 года, когда между Эцио и Миневрой происходит серьезный разговор, после которого ему вместе с дядей Марио приходится бежать из Рима. Их фамильная резиденция Монтериджори, оказывается в осаде наемниками, которых наняла семья Борджиа. Во время осады погибает дядя Марио, и Энцо вынужден бежать, оставив все нападавшим. Немного придя в себя, Эцио отправляется в Рим, полный решимости отомстить Чезаре и вернуть артефакт.
После этих событий сюжет переносит игрока в 1500 год, в котором Эцио уже является организатором подпольной борьбы против властей Рима. Город делится на 12 частей, и Эцио неспособен в одиночку справиться с наемниками Борджиа. Ему приходится привлекать в помощники людей, которые недовольны правлением Чезаре, и возрождать орден ассасинов. Руководя подпольем, Эцио не оставляет попытки найти виновных в убийстве своей семьи.
Во время прохождения игры, герой иногда встречает Леонардо да Винчи, который помогает Эцио оружием, которое он изобрел.
По сюжету, в прошлом игроку остается вернуть артефакт и убить предводителя ордена Тамплиеров.
В настоящем, во время выхода из Анимуса, Дезмонд посещает Монтериджони в поисках тайного укрытия под виллой, где по его данным находится Яблоко Эдема, способного остановить грядущую катастрофу. Но артефакта там не оказывается и Дезмонду приходится обратиться к Эцио, воспоминания которого приводят в Рим. Команда находит Яблоко в катакомбах под Колизеем, но при прикосновении к нему Дезмонд впадает в кому.
